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iFluor 488-amine,iFluor 488-氨基,iFluor 488 NH2
发布时间:2026-06-03     作者:wsw   分享到:

中文名:iFluor 488-氨基

英文名:iFluor 488-amine

iFluor 488-amine(iFluor 488-氨基,iFluor 488 NH2,iFluor 488 Amine,iFluor 488-NH2) 是一种含伯氨基(-NH₂)的活性荧光染料,分子量约555.53,激发波长491 nm,发射波长516 nm,外观为绿色至黄色固体,溶于DMSO、DMF等极性非质子溶剂,-20°C惰性气体保护下避光保存。其核心价值在于:伯氨基可与蛋白质、抗体、多肽等生物分子上的羧基(-COOH)、NHS酯、醛基、异硫氰酸酯等多种官能团发生高效共价偶联,是生物分子荧光标记中最通用的反应性基团之一。

从偶联化学角度看,iFluor 488-amine最经典的反应路径是与N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS Ester)的缩合。在pH 7.2–8.5的碳酸氢钠缓冲液中,伯氨基亲核进攻NHS酯的羰基碳,释放NHS leaving group,形成稳定的酰胺键。该反应在30分钟内即可完成,偶联效率可达95%以上。另一条常用路径是与醛基的还原胺化反应:伯氨基先与醛基形成Schiff碱(亚胺),再用NaBH₃CN或NaBH(OAc)₃还原为稳定的仲胺键,适用于标记带有多糖醛基的糖蛋白。

标记抗体时,关键参数是染料/蛋白摩尔比(D/P ratio)。iFluor 488-amine的推荐D/P为6–10:1。过低则标记不完全,信号弱;过高则可能导致抗体聚集、抗原结合位点被遮蔽、以及荧光自淬灭(self-quenching)。实际操作中,先将iFluor 488-amine溶于无水DMSO(10 mg/mL储存液),逐滴加入抗体溶液(1 mg/mL,PBS缓冲液),边加边涡旋,室温避光反应1小时。反应完成后用脱盐柱(如Zeba Spin Column, 7K MWCO)或透析去除游离染料,测定D/P比值:OD495/OD280应在0.3–0.8之间为理想范围。

相较于iFluor 488 NHS Ester(即琥珀酰亚胺酯形式),iFluor 488-amine具有独特优势:它不受NHS酯水解的限制,储存稳定性更好,且可与醛基、环氧化物等更多样化的活性基团反应,适用范围更广。但代价是偶联反应速度略慢于NHS酯,需更长的反应时间或更高的pH。

在应用层面,iFluor 488-amine被广泛用于:抗体荧光标记、流式细胞术样品制备、单分子FRET供体标记、以及纳米颗粒表面的荧光功能化。特别是在超分辨显微成像(STORM/PALM)中,iFluor 488的高光转换效率使其成为光激活定位显微镜的优选染料之一。

iFluor 488-amine

产地:西安

供应商:西安球赛在线直播平台 生物科技有限公司

纯度:99%

用途:仅用于科研

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!

 

关于我们:

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