Fluorescein dT Amidite，荧光素 dT 亚磷酰胺，6-FAM-dT Phosphoramidite-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安球赛在线直播平台生物

Fluorescein dT Amidite（荧光素 dT 亚磷酰胺，6-FAM-dT Phosphoramidite，Fluorescein-dT-CE，FITC-dT Amidite）是一种专为自动化DNA/RNA合成仪设计的亚磷酰胺单体试剂，由荧光素（Fluorescein）荧光基团、脱氧胸苷（dT）碱基和3'-亚磷酰胺活性基团三部分构成。其分子量约776.62，外观为黄色至橙黄色固体，溶于无水乙腈（ACN），需-20°C惰性气体（氩气或氮气）保护下避光保存。

亚磷酰胺化学是现代寡核苷酸固相合成的核心技术，由Bruce Merrifield于1963年开创并获诺贝尔奖。其基本循环包括四步：去保护（Detritylation）→ 偶联（Coupling）→ 封端（Capping）→ 氧化（Oxidation）。Fluorescein dT Amidite在偶联步骤中，其亚磷酰胺基团在四唑类活化剂（如ETT、DCI）催化下与固载在CPG（可控孔径玻璃珠）上的 growing chain 的5'-羟基反应，形成亚磷酸三酯键，随后被碘溶液氧化为稳定的磷酸三酯键。每个循环的偶联效率需达到99%以上，才能保证20–60 mer长度的寡核苷酸获得可接受的全长产率。

荧光素基团通过其6位氨基上的长链连接臂（通常为6-氨基己酸，即C6 linker）与dT的5位甲基相连。这一连接臂的设计至关重要：它将体积庞大的荧光素与DNA主链隔开，避免空间位阻对杂交效率的影响。同时，C6 linker还能减少荧光素与相邻碱基之间的荧光淬灭效应（即stacking quenching），使标记后的寡核苷酸在游离态和杂交态下均保持高荧光强度。

在实际合成中，Fluorescein dT Amidite通常被安排在寡核苷酸的5'末端或内部特定位置引入。5'端标记最为常用，因为合成仪可在最后一个循环中直接用该单体替代普通dT Amidite。内部标记则需要在合成中途切换试剂瓶，并注意荧光素的二甲基甲酰胺（DMF）溶液在长时间输送管路中可能发生沉淀，因此推荐使用专门的"Fluorescein bottle"和加速脱block方案。

脱保护与切割完成后，粗产物需经反相HPLC纯化。由于荧光素在碱性条件下会开环生成无荧光的醌式结构，所有缓冲液pH须严格控制在7.5以下。纯化后用NanoDrop测定浓度和OD260/OD494比值，理想值应在0.3–0.5之间，表明荧光素与寡核苷酸的标记比例接近1:1。

该试剂是制备荧光定量PCR探针、FISH杂交探针、分子信标（Molecular Beacon）、以及DNA微阵列探针的核心原料，在基因组学和分子诊断基础研究中不可或缺。

Fluorescein dT Amidite

产地：西安

供应商：西安球赛在线直播平台生物科技有限公司

纯度：99%

用途：仅用于科研

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！

关于我们：

西安球赛在线直播平台生物科技有限公司是一家从事原料药、MOF，离子液体 ,PEG衍生物、科研试剂、多肽、光电材料、碳纳米管、纳米材料、脂质体、合成磷脂的研发、定制合成、生产和销售的高科技生物科技有限公司。